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    喹諾酮類(lèi)快速檢測試劑盒
    喹諾酮類(lèi)快速檢測試劑盒
    更新時(shí)間:2023-10-27
    訪(fǎng)問(wèn)量: 1983
    廠(chǎng)商性質(zhì): 生產(chǎn)廠(chǎng)家

    喹諾酮類(lèi)快速檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法用于檢測殘留物喹諾酮類(lèi)藥物的含量

    喹諾酮類(lèi)快速檢測試劑盒產(chǎn)品概述:

    EF03B-J2b                     2016-01

    喹諾酮類(lèi)

    快速檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

    一、原理

       試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物喹諾酮類(lèi)藥物和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗喹諾酮類(lèi)藥物抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留喹諾酮類(lèi)藥物的含量成負相關(guān),與標準曲線(xiàn)比較即可得出相應殘留物喹諾酮類(lèi)藥物的含量。

    二、試劑盒特性

    • 試劑盒靈敏度:      0.1ppb

    • 孵育溫度:          25℃

    • 孵育時(shí)間:          30min~15min

    • 樣本檢測下限

    組織 、血清 ——————————1ppb

    • 交叉反應率

    恩諾沙星(ENR)   ————————100%

    環(huán)丙沙星(CIF)   ·————————  100%

    氧氟沙星(OFL)    ·————————  60%

    奧索利酸(OXO)  ·————————  116.86%

    達氟沙星(DAN)  ——————————  102.63%

    諾氟沙星(NOR)  ——————————  148.65%

    洛美沙星(LOM)  ——————————   86.24%

    培氟沙星(PEF)   ·——————————  156.60%

    依諾沙星(ENO)  ——————————   98.97%

    氟喹酸(FLU)    ——————————   96.73%

    麻保沙星(MAR)  ·——————————110.63%

    氨氟沙星(AMI)  ————————————  98.86%

    那氟沙星(NAD)  ————————————   56.81%

    • 樣本回收率

    組織、血清 ·———————————— 85±20%

    三、試劑盒組成

    1

    微量測試孔

    每條8孔,一板12條

    2

    標準液×6瓶

    (1ml/瓶)

    0ppb

    0.1ppb

    0.3ppb

    0.9ppb

    2.7ppb

    8.1ppb

    3

    酶標記物

    7ml

    紅色帽

    4

    抗體工作液

    7ml

    藍色帽

    5

    底物A液

    7ml

    白色帽

    6

    底物B液

    7ml

    黑色帽

    7

    終止液

    7ml

    黃色帽

    8

    20X濃縮洗滌液

    40ml

    白色帽

    9

    20X濃縮復溶液

    50ml

    透明帽

    四、所用儀器、試劑

    具備的儀器微孔酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)

    微量移液器:?jiǎn)蔚?20~200ul、單道100~1000ul、多道 250 ul

    五、樣本前處理步驟

    • 樣本處理前須知

    處理任何樣本時(shí),都必須注意:

    (a) 實(shí)驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。

    (b) 實(shí)驗之前須檢查各種實(shí)驗器具是否干凈,必要時(shí)可對實(shí)驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗結果。

    • 樣本前處理需配制:

    配液1 樣本復溶液

    將20X濃縮復溶液用去離子水按1:19(1份濃縮復溶液+19份去離子水)進(jìn)行稀釋。

    • 樣本處理:

    a)組織樣本處理方法

    1、稱(chēng)1.0±0.05g 均質(zhì)過(guò)的組織樣本于50ml離心管中;

    2、加入10ml樣本復溶液,振蕩3min,4000r/min以上,15℃離心10min;

    3、取上清50µl液體用于分析。

    樣本稀釋倍數:10

    b)血清樣本處理方法

    • 50µl澄清的血清,加入450µl 樣本復溶液混合,混勻30S(如果血清樣本渾濁,將樣本于10,4000r/min以上離心10min,分離出血清或過(guò)濾血清,直至得到澄清的樣本);

    • 50µl液體用于分析。

    樣本稀釋倍數:  10  

    六、 酶標免疫分析程序:

    • 測定前應須知:

    • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20-25℃)。

    • 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。

    • 在ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的*性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。

    • 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線(xiàn)照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

    • 操作步驟:

    • 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出,置室溫(20-25℃)平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

    • 按需要取出微孔條及板架,將不用的微孔板重新密封,保存于2-8℃,不要冷凍。

    • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

    • 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個(gè)樣本和標準品均需做2孔平行,并記錄標準孔的樣本孔所在的位置。

    • 加標準品/樣本50µl /孔,然后加酶標記物50μl/孔,再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板,25℃環(huán)境反應30min。

    • 用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

    • 顯色:每孔加入底物A液50µl再加入底物B液50µl,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境避光顯色15min。

    • 測定:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長(cháng)450/630nm檢測,在5min內讀完數據),測定吸光度值(OD值)。

    七、結果判定

    結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含喹諾酮類(lèi)藥物量成負相關(guān)。

    1、粗略判定:

    用樣本的平均吸光度值與標準品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.238, 樣本2的吸光度值為0.946,標準液吸光度值分別是:0ppb為1.845; 0.1ppb為1.542;0.3ppb為1.130; 0.9ppb為0.635;2.7ppb為0.326; 8.1ppb為0.156。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物的實(shí)際濃度。

    2、定量分析

    (1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

    百分吸光(%)=

    B

    ×100%

    B0

    B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

    B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

    (2)標準曲線(xiàn)的繪制與計算

    以標準品百分吸光率為縱坐標,以喹諾酮類(lèi)標準品濃度(ng/ml)的半對數為橫坐標,繪制標準曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線(xiàn)中,從標準曲線(xiàn)上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。

    八、 注意事項

    • 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(20-25℃)會(huì )導致所有標準的OD值偏低。

    • 在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況,則會(huì )伴隨著(zhù)標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。

    • 混合要均勻,否則會(huì )出現重復性不好的現象。

    • 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

    • 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì )引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

    • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。

    • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

    • 該試劑盒zui理想反應溫度為25℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

    九、儲藏條件和保質(zhì)期

    • 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。

    • 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

    提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實(shí)驗結果,請放心使用。

    2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫學(xué)實(shí)驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

    如果您受時(shí)間、試驗條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

     

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