更新時(shí)間: | 2023-10-27 |
訪(fǎng)問(wèn)量: | 1983 |
廠(chǎng)商性質(zhì): | 生產(chǎn)廠(chǎng)家 |
喹諾酮類(lèi)快速檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法用于檢測殘留物喹諾酮類(lèi)藥物的含量
EF03B-J2b 2016-01版
喹諾酮類(lèi)
快速檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)
一、原理
試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物喹諾酮類(lèi)藥物和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗喹諾酮類(lèi)藥物抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留喹諾酮類(lèi)藥物的含量成負相關(guān),與標準曲線(xiàn)比較即可得出相應殘留物喹諾酮類(lèi)藥物的含量。
二、試劑盒特性
試劑盒靈敏度: 0.1ppb
孵育溫度: 25℃
孵育時(shí)間: 30min~15min
樣本檢測下限
組織 、血清 ——————————1ppb
交叉反應率
恩諾沙星(ENR) ————————100%
環(huán)丙沙星(CIF) ·———————— 100%
氧氟沙星(OFL) ·———————— 60%
奧索利酸(OXO) ·———————— 116.86%
達氟沙星(DAN) —————————— 102.63%
諾氟沙星(NOR) —————————— 148.65%
洛美沙星(LOM) —————————— 86.24%
培氟沙星(PEF) ·—————————— 156.60%
依諾沙星(ENO) —————————— 98.97%
氟喹酸(FLU) —————————— 96.73%
麻保沙星(MAR) ·——————————110.63%
氨氟沙星(AMI) ———————————— 98.86%
那氟沙星(NAD) ———————————— 56.81%
樣本回收率
組織、血清 ·———————————— 85±20%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 20X濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:微孔酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:?jiǎn)蔚?20~200ul、單道100~1000ul、多道 250 ul
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時(shí),都必須注意:
(a) 實(shí)驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
(b) 實(shí)驗之前須檢查各種實(shí)驗器具是否干凈,必要時(shí)可對實(shí)驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗結果。
樣本前處理需配制:
配液1 樣本復溶液
將20X濃縮復溶液用去離子水按1:19(1份濃縮復溶液+19份去離子水)進(jìn)行稀釋。
樣本處理:
a)組織樣本處理方法
1、稱(chēng)1.0±0.05g 均質(zhì)過(guò)的組織樣本于50ml離心管中;
2、加入10ml樣本復溶液,振蕩3min,4000r/min以上,15℃離心10min;
3、取上清50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數:10
b)血清樣本處理方法
取50µl澄清的血清,加入450µl 樣本復溶液混合,混勻30S(如果血清樣本渾濁,將樣本于10℃,4000r/min以上離心10min,分離出血清或過(guò)濾血清,直至得到澄清的樣本);
取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數: 10倍
六、 酶標免疫分析程序:
測定前應須知:
使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20-25℃)。
使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
在ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的*性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。
所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線(xiàn)照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
操作步驟:
將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出,置室溫(20-25℃)平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
按需要取出微孔條及板架,將不用的微孔板重新密封,保存于2-8℃,不要冷凍。
配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個(gè)樣本和標準品均需做2孔平行,并記錄標準孔的樣本孔所在的位置。
加標準品/樣本50µl /孔,然后加酶標記物50μl/孔,再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板,25℃環(huán)境反應30min。
用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
顯色:每孔加入底物A液50µl再加入底物B液50µl,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境避光顯色15min。
測定:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長(cháng)450/630nm檢測,在5min內讀完數據),測定吸光度值(OD值)。
七、結果判定
結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含喹諾酮類(lèi)藥物量成負相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標準品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.238, 樣本2的吸光度值為0.946,標準液吸光度值分別是:0ppb為1.845; 0.1ppb為1.542;0.3ppb為1.130; 0.9ppb為0.635;2.7ppb為0.326; 8.1ppb為0.156。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb。乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物的實(shí)際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
(2)標準曲線(xiàn)的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標,以喹諾酮類(lèi)標準品濃度(ng/ml)的半對數為橫坐標,繪制標準曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線(xiàn)中,從標準曲線(xiàn)上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(20-25℃)會(huì )導致所有標準的OD值偏低。
在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況,則會(huì )伴隨著(zhù)標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。
混合要均勻,否則會(huì )出現重復性不好的現象。
反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì )引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
該試劑盒zui理想反應溫度為25℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。
提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實(shí)驗結果,請放心使用。
從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫學(xué)實(shí)驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!
如果您受時(shí)間、試驗條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
實(shí)驗代做服務(wù):
試劑盒免費代檢測 | 石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光 | 掃描電鏡服務(wù) | 實(shí)驗室代做實(shí)驗項目
|
透射電鏡服務(wù)實(shí)驗服務(wù) | 石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡 | 核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗服務(wù) | 細胞熒光染料標記檢測實(shí)驗
|
RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗代做 | HE染色 | 六胺銀法染色實(shí)驗服務(wù) | 天狼猩紅染色實(shí)驗服務(wù)
|
網(wǎng)狀纖維染色銀染實(shí)驗服務(wù) | 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗服務(wù)
| 免疫組化IHC染色實(shí)驗服務(wù) | 油紅O染色實(shí)驗服務(wù) |
ATP/ADP檢測實(shí)驗服務(wù) | 蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗服務(wù) | 免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗代做 | 免疫細胞化學(xué)ICC實(shí)驗服務(wù) |
PKC活性檢測實(shí)驗 | 免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗
| 蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗服務(wù) | 端粒酶活性檢測實(shí)驗 |
探針合成實(shí)驗服務(wù) | NF-KB p65活性檢測實(shí)驗
| 喹諾酮類(lèi)快速檢測試劑盒 | 雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒 |